2 x Taq PCR Plus Mix

產(chǎn)品描述

2 x Taq PCR Plus Mix 是PCR 反應(yīng)預(yù)混液，其中包含Taq DNA Polymerase、dNTPs、反應(yīng)緩沖液、loading Dye 等成分，使用時(shí)只需取適量本產(chǎn)品，加入模板和引物，并加入 ddH2O 補(bǔ)足體積，使反應(yīng)體系濃度為 1× 即可進(jìn)行 PCR 反應(yīng)。PCR 產(chǎn)物 3' 端帶突出 A 堿基，純化后可直接用于 T/A 克隆。

本產(chǎn)品采用復(fù)合酶系統(tǒng)即Taq DNA聚合酶與3'→5'外切酶活性蛋白協(xié)同作用，可在優(yōu)化反應(yīng)緩沖體系下實(shí)現(xiàn)高產(chǎn)量擴(kuò)增，能擴(kuò)增≤7 kb的DNA片段，且兼容30%-70% GC含量的模板。相較于傳統(tǒng)Taq酶（WT-Taq），其延伸速率提升2-4倍，顯著縮短反應(yīng)周期。

本產(chǎn)品中包含兩種染料，PCR反應(yīng)完成后無(wú)需額外添加 loading buffer，可以直接進(jìn)行電泳，且電泳過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)藍(lán)色和紅色兩個(gè)指示條帶。該染料不影響 PCR 擴(kuò)增效率，但對(duì)于需要對(duì) PCR 產(chǎn)物進(jìn)行吸光度、熒光等光學(xué)分析的實(shí)驗(yàn)，建議在分析前對(duì) PCR 產(chǎn)物進(jìn)行純化，或使用無(wú)染料的PCR預(yù)混液。

訂購(gòu)信息

運(yùn)輸與保存

藍(lán)冰運(yùn)輸。-20℃保存，有效期24個(gè)月。

使用方法

1.     常規(guī) PCR 反應(yīng)體系（冰上操作）

(1)     引物推薦終濃度為 0.2~0.4 μM，效果不佳時(shí)可以在 0.1~1 μM 濃度范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整； 

(2)     不同模板*佳反應(yīng)濃度有所不同，以 50 μL 體系為例：模板為基因組 DNA 時(shí)，一般推薦的使用量為 10~200 ng；當(dāng)模板為質(zhì)粒或病毒 DNA 時(shí)，一般推薦的使用量為 10 pg~5 ng。 模板量過(guò)多時(shí)容易造成非特異性擴(kuò)增。

2.     三步法 PCR 反應(yīng)程序

3.     兩步法 PCR 反應(yīng)程序

(3)     該預(yù)變性條件適合絕大多數(shù)擴(kuò)增反應(yīng)， 對(duì)于一些復(fù)雜模板， 例如：菌液、菌落（尤 其是酵母）的PCR 擴(kuò)增，預(yù)變性時(shí)間可適當(dāng)延長(zhǎng)至 10 min，以提高預(yù)變性效果；

(4)     退火溫度請(qǐng)根據(jù)引物 Tm 值設(shè)置。如果需要，推薦通過(guò)建立溫度梯度尋找引物與模板結(jié)合的*適溫度。此外，退火溫度直接決定擴(kuò)增特異性，如發(fā)現(xiàn)擴(kuò)增特異性差，可適當(dāng)提高退火溫度。

(5)     關(guān)于延伸速率，當(dāng)目的片段長(zhǎng)度不超過(guò) 3 kb 時(shí)，推薦使用 15 sec/ kb；當(dāng)目的片段長(zhǎng)度大于 3 kb 時(shí)，推薦使用 30 sec/kb。延伸速率與模板復(fù)雜程度有關(guān)，如遇產(chǎn)率較低可適當(dāng)提高延伸時(shí)間。

注意事項(xiàng)

1.         本產(chǎn)品科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

2.         本產(chǎn)品中2 x Taq PCR Plus Mix需融解*全后使用，防止離子濃度不均勻。

3.         建議將所有的反應(yīng)組分在冰上配制，最后加入2 x Taq PCR Plus Mix。

4.         使用基因組模板進(jìn)行較長(zhǎng)片段擴(kuò)增需要使用高質(zhì)量純化的DNA模板，可以提高 PCR 成功率。

5.         本產(chǎn)品擴(kuò)增產(chǎn)物可用于 T/A 克隆。由于本產(chǎn)品含有 Loading Dye，PCR 產(chǎn)物需經(jīng)過(guò)切膠回收后才可充分去除 Loading Dye。

6.         建議使用泡染法進(jìn)行電泳后染色，膠染法會(huì)導(dǎo)致紅色指示條帶發(fā)生彌散，不利于條帶指示，對(duì)藍(lán)色指示條帶無(wú)影響。藍(lán)色條帶在 1% TAE 緩沖液中遷移速率約等于1500 bp，紅色條帶在 1% TAE 緩沖液中遷移速率約等于100 bp。

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